总磷的测定

分析方法及标准：

钼酸铵分光光度法

仪器：

立式高压灭菌锅、紫外分光光度计、50mL比色管。

药剂配置：

1、5％过硫酸钾溶液：溶解5g过硫酸钾于水中，并稀释至100mL。

2、（1＋1）硫酸：将150mL浓硫酸缓缓倒入150mL蒸馏水中。

3、10％抗坏血酸溶液：溶解10g抗坏血酸于水中，并稀释至100m溶液贮存在棕色试剂瓶中，在约4℃可稳定几周。

4、钼酸盐溶液：溶解13g钼酸铵于100mL水中。溶解0.35g酒石酸锑钾于100mL水中。在不断搅拌下，将铝酸铵溶液徐徐加到300mL（1＋1）硫酸中，加酒石酸锑钾溶液并混合均匀。贮存在棕色试剂瓶中，在冷处可保存二个月。

标准溶液配置：

磷标准贮备溶液（50mg／L）：将优级纯磷酸二氢钾于110℃干燥2h，在干燥器中放冷。称取0.2197±0.001g溶于水，移入1000mL容量瓶中，加入大约800mL水，加（1-1）硫酸5mL，用水稀释至标线。磷标准使用溶液（2mg／L）：吸取10.00磷酸盐贮备液于250mL容量瓶中，用水稀释至标线。

标准曲线绘制：

分取量取磷酸盐标准溶液0.00、0.50、1.00、3.00、5.00、10.00、15.00mL于50mL具塞磨口玻璃比色管中，加水稀释至25mL标线，再加入4mL过硫酸钾溶液，然后按检测步骤2、3、进行处理。

检测步骤：

1、取适量水样于50mL比色管中，稀释至25ml（同做空白），加入4mL过硫酸钾溶液：

2、将比色管盖富后，用棉线和纱布扎紧摇匀后，放入离压灭菌锅中加热，特加热120℃时，计时30分钟后停止加热；待压力表读数降至零时，取出放冷，然后用水稀释至标线：

3、再加入1mL抗坏血酸溶液，2mL钼酸盐溶液，盖塞摇匀，静置15分钟后，在波长700nm处，用光程30mm比色皿，以燕馏水为参比，测量吸光度。

计算：

总磷含量C（mg／L）＝m/v   

m-试样测得含磷量, 单位：ug

V-测定用试样体积，单位：mL

检测原理：

在中性条件下用过硫酸钾使试样消解，将所含磷全部氧化为正磷酸盐。在酸性介质中，正磷酸盐与钼酸铵反应，在锑盐存在下生成磷钼杂多酸后，立即被抗坏血酸还原，生成蓝色络合物。

技术要求：

1、校准曲线相关系数R值必须大于0.999。

2、比色皿用后应以稀硝酸或铬酸洗液浸泡片刻，可以去除吸附的钼蓝有色物。

3、如显色时室温低于12℃，可在20-30℃水浴中显色15min即可。

安全注意：

1、使用前要检查玻璃仪器是否有破损，不要使用有缺口或裂缝的玻璃器皿。

2、配制稀硫酸时，将浓硫酸缓缓沿杯壁倒入，要缓慢的加入，倒入时，边倒入边搅拌用玻璃棒。

3、使用高压灭菌锅，注意检查桶内水量是否足够、螺丝是否柠紧以及消解后压力表读数是否为零时才取出试样。