总氮的测定

分析方法及标准：

碱性过硫酸钾紫外分光光度法

仪器：

立式高压灭菌锅、紫外分光光度计、25mL具塞玻璃磨口比色管

药剂配置：

1、称取 40.0g 过硫酸钾溶于 600ml 水中（可置于 50℃水浴中加热至全部溶解）；另 称取 15.0g 氢氧化钠（6.2）溶于 300ml 水中。待氢氧化钠溶液温度冷却至室温后，混合两种溶液定容至 1000ml，存放于聚乙烯瓶中，可保存一周。（可适量按比例减量）

2、（1＋9）盐酸：在90mL蒸馏水中缓缓倒入10mL的浓盐酸，可保存一周。

标准溶液配置：

1．碘酸标标准贮备液（100mg／L）：称取0.72180经105-110℃烘干2h、在干燥圆中冷却至室温的优级纯消酸钾溶于无氨水中，移入1000ml常量瓶中，稀释至标线。（加入1至2mL三氧甲焥作为保护剂，在0至10°C暗处保存，可稳定6个月。

2、硝酸钾标准使用液（10mg／L）：移取10.00mL硝酸钾标准贮备液于100mL容量瓶中，用无氨水稀释至标线。

标准曲线绘制：

分期量取0.00、0.20、0.50、1.00、5.00.700mL硝酸钾标准使用液于25mL具塞磨口玻璃比色管中，加无氨水稀释至10.00mL，再加入500mL碱性过流酸钾溶液，然后按检测步骤2、3、4、进行处理。

检测步骤：

1、取道量水样于25mL具塞磨口玻璃比色管中（同做空白），加无氩水稀释至10.00mL，再加入5．00ml碱性过硫酸钾溶液

2、蒋比色管盖塞后，用棉线和纱布扎紧摇匀后，放入离压灭菌锅中加热，待加热120℃时，计时30分钟后停止加热，将高压灭菌锅的压力表读数降至零时，取出比色管冷却至室温；

3．分则加入1mL盐酸（1＋9）溶液，再用无氨水稀释至25mL标线，盖塞，摇匀：

4、在紫外分光光度计上，用10mm石英比色皿，以无氨水作参比，分别在渡长220nm、275nm处测定吸光度。

计算：

Ab=Ab220-2Ab275

AS=As220-2A8275

Ar＝As－Ab       

AD-空白溶液的校正吸光度：

Ab220-空白在渡长220nm处的吸光度；

Ab275-空白在渡长275处的吸光度；

As-检测样品的校正覆光度：

As220-样品在渡长220nm处的吸光度；

As275-样品在渡长275处的吸光度：

Ar-样品校正役光度与空白校正吸光度的差值。

ρ ——样品中总氮（以 N 计）的质量浓度，mg/L；

a ——校准曲线的截距；

b ——校准曲线的斜率；

V ——试样体积，ml；

检测原理：

在120-124℃下，减性过硫酸钾作氧化剂，不仅可将水样中的氨氮和亚硝酸盐氨氮化为硝酸盐。同时将水样中大部分有机氮化合物氧化为硝酸盐。

技术要求：

1、当测定在接近检测量大值或最小值时，必须控制空白试验的吸光度（Ab ）应不超过 0.03。超过此值，应检查实验用水、试剂，器皿和家用压力锅或手提灭菌器的压力

2，校准曲线的相关系数 R 值必须大于0.999。

安全注意：

1、浓盐酸易挥发、有腐蚀性，请在通风橱操作。

2、使用高压灭菌锅，注意检查桶内水量是否足够、螺丝是否拧紧以及消解后压力表读数是否为零时才取出试样

3、使用前要检查玻璃仪器是否有破损，不要使用有缺口或裂缝的玻璃器皿。